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探討人類凝血酶調節素調控凝血酶訊號傳遞的作用機制
為了解決Coway 1515 的問題,作者唐健豪 這樣論述:
凝血酶(Thrombin)是促進血液凝固的蛋白質,另外具有刺激血小板聚集、刺激細胞生長、活化免疫反應等的活性。凝血酶調控細胞生物活性,是分別透過結合蛋白酶活化接受器(protease activated receptors ; PARs)及凝血酶調節素(Thrombomodulin ; TM)二種不同接受器。本論文的主要目的在探討PAR 與TM 傳遞凝血酶訊號之機制差異。我們利用表現PAR-1 的人類胚胎腎臟細胞(human embryonic kidney ; HEK293 cells)轉染TM 基因為研究模式,轉殖TM 基因後之 HEK293 細胞命名為HEK293TM,觀察細胞型態及生
長,發現HEK293TM 細胞型態聚集,生長速率約為HEK293 細胞之1/2。在凝血酶誘導的細胞爬行分析中,HEK293TM 細胞爬行能力較HEK293 增高為1.5 倍,ERK(Extracellular regulated kinase) 抑制劑U0126 , 可抑制HEK293TM 及HEK293 細胞爬行。分析TM 表現對凝血酶相關訊號機制之影響,HEK293 細胞在7.5 nM 凝血酶刺激20 分鐘後活化ERK,磷酸化提高為刺激前之1.5 倍,60、120、240 分鐘後之ERK 磷酸化逐步降低至基本值,而HEK293TM 細胞中ERK 有3 倍的活化,且磷酸化持續到4小時;同樣於
HEK293TM 細胞,凝血酶激活PKB/Akt(protein kinase B)或PKC(protein kinase C)的能力也較HEK293 細胞高,且持續至4小時。進一步探討PKC 與ERK 間訊號路徑之交互作用,使用PKC 活性抑制劑Ro318220,發現並未影響HEK293TM 細胞中ERK 之活化及延長磷酸化,顯示PKC 未參與TM 所造成的ERK 延長磷酸化。TM 表現可以提升凝血酶經由PAR-1 傳遞的ERK、PKC 等活化訊號,造成細胞聚集,抑制細胞的生長,此外,PAR-1 及TM 經由活化ERK 而媒介凝血酶之促使細胞爬行活性。
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